酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay)(簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶連接,然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),用于定量測(cè)定。測(cè)定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。
抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑) ②酶標(biāo)記的抗原或抗體(標(biāo)記物)③酶作用的底物(顯色劑)。測(cè)量時(shí),抗原(抗體)先結(jié)合在固相載體上,但仍保留其免疫活性,洗滌后加入待檢測(cè)蛋白,洗滌后再加入一種抗體(抗原)與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物(標(biāo)記物),此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性,當(dāng)偶聯(lián)物與固相載體上的抗原(抗體)反應(yīng)結(jié)合后,最后再加上酶的相應(yīng)底物,即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色。
在實(shí)際應(yīng)用中,通過(guò)不同的設(shè)計(jì),具體的方法步驟可有多種??梢圆捎秒p抗夾心法或者競(jìng)爭(zhēng)法對(duì)抗原進(jìn)行定性或者定量檢測(cè),用間接法對(duì)抗體進(jìn)行檢測(cè)定性或定量檢測(cè),具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。

(資料來(lái)源:愛(ài)博泰克)