技術(shù)概述
哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)是由哺乳動(dòng)物細(xì)胞翻譯后再加工修飾產(chǎn)生的外源蛋白，是生產(chǎn)天然蛋白的理想表達(dá)系統(tǒng)，也是應(yīng)用最廣泛地動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。它的優(yōu)勢(shì)在于能指導(dǎo)蛋白質(zhì)的正確折疊，提供復(fù)雜的N型糖基化和準(zhǔn)確的O型糖基化等多種翻譯后加工功能，它的表達(dá)產(chǎn)物接近于天然的高等生物蛋白質(zhì)分子[1]。中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢CHO（Chinese hamster ovary）細(xì)胞在的哺乳類(lèi)基因表達(dá)受體細(xì)胞應(yīng)用最廣泛[1]。CHO細(xì)胞表達(dá)外源基因產(chǎn)物在結(jié)構(gòu)、糖基化類(lèi)型和方式上與天然蛋白幾乎相同，能正確組裝多亞基蛋白，并能大規(guī)模培養(yǎng)[3]。哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)主要應(yīng)用于生產(chǎn)單克隆抗體，生產(chǎn)尿激酶，生產(chǎn)促卵泡激素，制備基因工程藥物等[4]。
技術(shù)詳情
| 載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
| pCDNA3.1(-) | CMV | / | 氨芐青霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pCDNA3.1(+) | CMV | / | 氨芐青霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pCDNA3.1(+)-flag | CMV | 3×FLAG | 氨芐青霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pCDNA3.1-V5-His | CMV | V5 ,His | 氨芐青霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pCDNA3.1-myc-His A | CMV | C-His,C-Myc | 氨芐青霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pCDNA3.0 | CMV | / | 氨芐青霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pCDNA3-HA-N | CMV | N-HA | 氨芐青霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pCDNA3.1-3×HA-C | CMV | C-3×HA | 氨芐青霉素 | 遺傳霉素 | / |
| pCDNA3.1-3×FLAG-N | CMV | N-3×FLAG | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pCDNA3.1(+)-Zeo | CMV | / | 氨芐青霉素 | 博來(lái)霉素 | / |
| pCDNA3.1-3×HA-N | CMV | N-3×HA | 氨芐青霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pCDNA3.1-GST | CMV | C-GST | 氨芐青霉素 | 遺傳霉素 | / |
| pCDNA3.1-HA-Hygro | ? | HA | 氨芐青霉素 | 潮霉素 | / |
| pCDNA3.1(-)-Myc-His A | CMV | C-6×His,?C-Myc | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pCDNA3.1(-)-Myc-His B | CMV | C-6×His, C-Myc | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pCDNA3.1-Myc-HisB(+) | CMV | C-6×His,C-Myc | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pcDNA3.1-V5-His B | CMV | C-6×His, C-V5 | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pcDNA4-HisA | CMV | C-6×His, C-Xpress | 氨芐青霉素 | 博來(lái)霉素 | / |
| pCDNA6-Myc-HisB | CMV | C-myc,C-6×His | 氨芐青霉素 | 殺稻瘟菌素 | / |
| 載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
| pCMV-3Tag-8 | CMV | 3×FLAG | 氨芐青霉素 | / | 可供構(gòu)建 |
| pCMV-Tag 2C | CMV | FLAG | 卡那霉素 | 新霉素 | 可供構(gòu)建 |
| p3xFLAG-CMV-14 | CMV | C-3×flag | 氨芐青霉素 | 遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pCS2+ | CMV | / | 氨芐青霉素 | / | 可供構(gòu)建 |
| pCS2(+)-Flag | CMV | FLAG | 氨芐青霉素 | / | 可供構(gòu)建 |
| pCS2(+)-HA | CMV | HA | 氨芐青霉素 | / | 可供構(gòu)建 |
| pVAX1 | CMV,T7 | / | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| p3×FLAG-CMV-8 | CMV | N-3×FLAG | 氨芐青霉素 | / | / |
| pCMV-FLAG-C | CMV | C-3×FLAG | 氨芐青霉素 | / | / |
| p3xFLAG-Myc-CMV-24 | CMV | ? | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pCMV-His-N | CMV | N-His | 氨芐青霉素 | / | / |
| pCMV-Tag 4A | CMV | C–FLAG | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pFLAG-CMV-6a | CMV | N-FLAG | 氨芐青霉素 | / | / |
| pNTAP-B | CMV | / | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pTracer-CMV2 | CMV | / | 氨芐青霉素,博來(lái)霉素 | 博來(lái)霉素 | / |
| p3×FLAG-CMV-10 | CMV | N-3×FLAG | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| p3xFLAG-CMV-7.1 | CMV | N-3×FLAG | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| p3xFLAG-CMV-14 | CMV | C-3×FLAG | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pCMV-LacZ | CMV | / | 氨芐青霉素 | / | / |
| pCMV-Tag 2B | CMV | N-Flag | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pCMV-Tag 3B | CMV | C-myc | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pCMV-Tag 4B | CMV | C-FLAG | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| 載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
| pIRESneo3 | CMV | / | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pIRESneo | CMV | / | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
pCAG.OSF | CAG | / | 氨芐青霉素 | / | / |
pHLmMBP-10 | CAG | MBP,C-6×His,C-HA | 氨芐青霉素 | / | / |
pCAG-IRES-Puro | CAG | IRES | 氨芐青霉素 | 嘌呤霉素 | / |
pCAGIG | CAG | EGFP | 氨芐青霉素 | / | / |
pCIG | CAG | EGFP | 氨芐青霉素 | / | / |
pCAGGS-Myc | CAG | N-Myc | 氨芐青霉素 | / | / |
pCAG-GFP | CAG | C-EGFP | 氨芐青霉素 | / | / |
pCAGGS-HA | CAG | N-HA | 氨芐青霉素 | / | / |
| 載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
| pEF1-Myc-HisB | EF-1α | C-6×His,C-MYC | 氨芐青霉素 | 遺傳霉素 | / |
| pEF4-V5-HisA | EF-1α | C-V5,C-6×His | 氨芐青霉素 | 博來(lái)霉素 | / |
| pEF-GFP | EF-1α | C-EGFP | 氨芐青霉素 | / | / |
| pEF1/V5-HisA | EF-1α | C-V5,C-6×His | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| 載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
| pENTR5-UbCp | UbC | / | 卡那霉素 | / | / |
| pcDNA3.1-ccdB-3xFLAG-V5 | CMV | 3xFLAG,V5 | 氨芐青霉素 | 潮霉素 | / |
| pN3 | CMV | / | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| 載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
| pACGFP1-N1 | CMV | C-GFP | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pCAG-IRES-EGFP | chicken β-actin | EGFP | 氨芐青霉素 | / | 可供構(gòu)建 |
| pCDNA3.1-EGFP | CMV | EGFP | 氨芐青霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pCMV-C-mCherry | CMV | C-mCherry | 卡那霉素 | 新霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pDsRed-Monomer-N1 | CMV | DsRed | 卡那霉素 | 新霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pEGFP-N3 | CMV | C-EGFP | 卡那霉素 | 新霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pEGFP-C1 | CMV | N-EGFP | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pEGFP-N1 | CMV | C-EGFP | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pIRES2-EGFP | CMV | EGFP | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pIRES2-GFP | CMV | EGFP | 氨芐青霉素 | 遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pTurboGFP | CMV | C-GFP | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pIRES2-DsRed-Express | CMV | DsRed | 卡那霉素 | 新霉素 | 可供構(gòu)建 |
| p2A-DsRed-Express | CMV | DsRed | 卡那霉素 | 新霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pAcGFP1-1 | CMV | C-AcGFP1 | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pCAG-DsRed1 | chicken β-actin | DsRed1 | 氨芐青霉素 | / | / |
| pDsRed-Express2-N1 | CMV | C-DsRed2 | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pDsRed2-ER | CMV | N-DsRed2 | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pDsRed2-N1 | CMV | C-DsRed2 | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pDsRed2-C1 | CMV | N-DsRed2 | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pDsRed2-Mito | CMV | N-DsRed2 | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pDsRed2-Nuc | CMV | DsRed2 | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pDsRed2-Peroxi | CMV | N-DsRed2,C-peroxi | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pEYFP-N1 | CMV | EYFP | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pEYFP-Mem | CMV | EYFP | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pEBFP2-N1 | CMV | EBFP2 | 卡那霉素 | 遺傳霉素 | / |
| pEBFP-C1 | CMV | N-EBFP | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pGL4.51 | CMV | Luc2 | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pmCherry-N1 | CMV | mCherry | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pmCherry-C1 | CMV | mCherry | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pmGeos-M-C1 | CMV | mEos2 | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pmGeos-M-N1 | CMV | mEos2 | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pmKO2-N1 | CMV | mKO2 | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pMyosin-PSmOrange | CMV | PSmOrange | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| ptdTomato-C1 | CMV | N-tdTomato | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| ptdTomato-N1 | CMV | C-tdTomato | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pTagBFP-N | CMV | TagBFP | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| 載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
| pCMV/myc/ER | CMV | c-Myc | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pCMV/myc/nuc | CMV | c-Myc | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pDsRed2-3×NLS | CMV | DsRed2 | 卡那霉素 | 遺傳霉素 | / |
| pEBFP-3×NLS | CMV | EBFP2,3×NLS | 卡那霉素 | 新霉素/遺傳霉素 | / |
| pEGFP-3×NLS | CMV | C-GFP | 卡那霉素 | 遺傳霉素 | / |
| pEGFP-Actin | CMV | GFP | 卡那霉素 | 遺傳霉素 | / |
| pEYFP-Golgi | CMV | EYFP | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pEYFP-Mem | CMV | EYFP | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pEYFP-tub | CMV | EYFP | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pDsRed2-Mito | CMV | DsRed2 | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pKillerRed-mem | CMV | C-mem,?C-KillerRed | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| 載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
| PiggyBac Dual promoter | CMV | GFP | 氨芐青霉素 | 嘌呤霉素 | / |
| Super PiggyBac Transposase | Polr2A | / | 氨芐青霉素 | / | / |
| pTol2-Promoter-T2A-EGFP | ZB-actin | C-GFP | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pT2-VENUS | T3，T7，chicken β-actin | / | 氨芐青霉素 | / | / |
| 載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
| pGenesil-1 | U6 | EGFP | 卡那霉素 | 遺傳霉素 | 可供構(gòu)建 |
| pCDNA6.2-GW–EmGFP-miR-Control | CMV | N-GFP | 壯觀霉素 | 殺稻瘟菌素 | / |
| pSD1211-U6-shRNA | CMV，U6 | AcGFP1 | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pSilencer 1.0-U6 | U6 | / | 氨芐青霉素 | / | / |
| pSilencer3.1-H1-Stuffer-Hygro | H1 | / | 氨芐青霉素 | 潮霉素 | / |
| pSilencer4.1-CMV puro-Stuffer | CMV | / | 氨芐青霉素 | 嘌呤霉素 | / |
| 載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
| pACT | CMV | / | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pACT-MyoD | CMV | / | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pBIND | CMV | / | 氨芐青霉素 | / | / |
| pBIND-Id | CMV | / | 氨芐青霉素 | / | / |
| pBD-p53 | CMV | / | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pCMV-AD | CMV | / | 氨芐青霉素 | / | / |
| pCMV-BD | CMV | Gal4-DBD | 卡那霉素 | 新霉素 | / |
| 載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
| pOPRSVI | CMV | / | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
| pCMVLacI | CMV | / | 氨芐青霉素 | 潮霉素 | / |
| 載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
| pcDNA5–FRT–TO | CMV/TetO2 | / | 氨芐青霉素 | 潮霉素 | / |
| pCMV-Tet3G | CMV | / | 氨芐青霉素,卡那霉素 | 新霉素 | / |
| pTK-hyg | HSV TK | / | 氨芐青霉素 | 潮霉素 | / |
| pTet-tTAK | Tet | / | 氨芐青霉素 | / | / |
| pTet-Splice | Tet | / | 氨芐青霉素 | / | / |
| pTet-Off | CMV | / | 氨芐青霉素 | 新霉素 | / |
參考文獻(xiàn)
1. Expression systems for heterologous proteinproduction[J]. Bio Pharm, 1989, 2:1.
2. 張軍要等. 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞高效表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展[J]. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，27：523-526.
3. 張國(guó)強(qiáng)等. 哺乳動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)載體的優(yōu)化[J]. 生物技術(shù)通訊, 2006, 17: 692-695.
4. Khan KH et al.Gene expression in Mammalian cells and its applications[J]. Adv Pharm Bull, 2013, 3: 257-263.
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