技術(shù)概述
昆蟲(chóng)表達(dá)載體可在昆蟲(chóng)細(xì)胞中表達(dá)真核基因，有桿狀病毒表達(dá)載體和果蠅表達(dá)載體。
桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)是目前應(yīng)用最廣的昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，在體外基因表達(dá)系統(tǒng)被廣泛應(yīng)用[1]，它是利用桿狀病毒作為外源基因的載體，通過(guò)感染昆蟲(chóng)細(xì)胞或者昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)來(lái)表達(dá)外源蛋白的系統(tǒng)[2]。桿狀病毒表達(dá)載體是以Sf9和Sf21細(xì)胞系以及家蠶為表達(dá)宿主，將外源基因克隆于轉(zhuǎn)移載體上，與病毒DNA共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，經(jīng)同源重組和篩選而得到重組病毒。桿狀病毒將外源基因?qū)氩溉閯?dòng)物細(xì)胞中，外源基因必須在哺乳動(dòng)物CMV、RSV等啟動(dòng)子啟動(dòng)下才能表達(dá)，表達(dá)的外源蛋白只有少部分是分泌性，大部分為非分泌性，而桿狀病毒基因組能被轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞中但不能在哺乳動(dòng)物的細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制。桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)主要應(yīng)用于蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能的研究、制備生物殺蟲(chóng)劑、重組蛋白的表達(dá)、基因治療和生產(chǎn)醫(yī)用蛋白及疫苗等方面[3]。
果蠅表達(dá)體系對(duì)宿主細(xì)胞基因組進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的昆蟲(chóng)細(xì)胞核基因轉(zhuǎn)化表達(dá)系統(tǒng)。以S2細(xì)胞為宿主細(xì)胞，表達(dá)載體上的啟動(dòng)子有Ac5啟動(dòng)子和MT啟動(dòng)子，使蛋白穩(wěn)定或瞬時(shí)高表達(dá)，表達(dá)載體可以多拷貝整合于宿主細(xì)胞基因組，從而提高目的蛋白的表達(dá)量，表達(dá)載體可以連續(xù)表達(dá)，也能誘導(dǎo)表達(dá)。
技術(shù)詳情
載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
pAc5.1-EGFP | AC5 | EGFP | 氨芐青霉素 | / | 可供構(gòu)建 |
pFastBac1 | Polyhedrin | / | 氨芐青霉素 | 慶大霉素 | 可供構(gòu)建 |
pFastBac1-eGFP | Polyhedrin | EGFP | 氨芐青霉素 | 慶大霉素 | 可供構(gòu)建 |
pIB-V5-His | OpIE2 | V5，C-His | 氨芐青霉素 | 殺稻瘟菌素 | 可供構(gòu)建 |
pAcGP67A | Polyhedrin | N-GP67 | 氨芐青霉素 | / | / |
pBacPAK8 | Polyhedrin | / | 氨芐青霉素 | / | / |
pBacPAK9 | Polyhedrin | / | 氨芐青霉素 | / | / |
pBacPAK8-His | Polyhedrin | N-His, N-TEV | 氨芐青霉素 | 慶大霉素 | / |
pFastBac1-Gus | PH | GUS | 氨芐青霉素 | 慶大霉素 | / |
pFastBac-GST-N | Polyhedrin | C-3C, C-GST | 氨芐青霉素 | 慶大霉素 | / |
pFastBac-GST-C | Polyhedrin | N-3C, N-GST | 氨芐青霉素 | 慶大霉素 | / |
pFastBacHTC | ? | 6×His | 氨芐青霉素 | 慶大霉素 | / |
pFastBacHT A | Polyhedrin | N-His, N-TEV, 6×His | 氨芐青霉素 | 慶大霉素 | / |
PFastBacHT?B | Polyhedrin | N-His, N-TEV, 6×His | 氨芐青霉素 | 慶大霉素 | / |
PFastBacHT?C | Polyhedrin | N-His, N-TEV, 6×His | 氨芐青霉素 | 慶大霉素 | / |
pIZ-V5-His | OpIE3 | V5，C-His | 博來(lái)霉素 | 博來(lái)霉素 | / |
pIZT-V5-His | OpIE2 | V5，C-His | 博來(lái)霉素 | 博來(lái)霉素 | / |
pIZT-DsRed2-V5-6×His | OpIE-2 | N-Dsred2, C-V5, C-6×His | 博來(lái)霉素 | 博來(lái)霉素 | / |
載體 | 啟動(dòng)子 | 報(bào)告基因/標(biāo)簽 | 原核抗性 | 篩選標(biāo)記 | 備注 |
pAc5.1-V5-His B | AC5 | V5,C-His | 氨芐青霉素 | / | 可供構(gòu)建 |
pAc5.1-V5-His A | AC5 | V5 ,C-His | 氨芐青霉素 | / | / |
pAc5-V5-HisA | AC5 | V5 ,C-His | 氨芐青霉素 | / | / |
pMT/BiP/V5-His A | MT | V5 ,6×His | 氨芐青霉素 | 潮霉素 | / |
參考文獻(xiàn)
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3 .孫陽(yáng)等.昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的研究及其新進(jìn)展[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2006, 18：96-99
4. Expression systems for heterologous proteinproduction[J]. Bio Pharm, 1989, 2:1
5. 張軍要等. 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞高效表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展[J]. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，27：523-526
6. 張國(guó)強(qiáng)等. 哺乳動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)載體的優(yōu)化[J]. 生物技術(shù)通訊, 2006, 17: 692-695
7. Khan KH et al.Gene expression in Mammalian cells and its applications[J]. Adv Pharm Bull,?2013,?3:?257-263
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