膠體金技術(shù)是以膠體金作為示蹤物來反映蛋白之間的反應(yīng)情況的一種技術(shù),通過肉眼即可判讀檢測結(jié)果,簡單方便,從加樣到判讀結(jié)果一般在10分鐘左右。
最經(jīng)典的膠體金技術(shù)為早早孕試紙條檢測,采用雙抗體夾心法制作。

如圖,當(dāng)陽性尿液從左側(cè)滴加進(jìn)去后,HCG首先層析到金標(biāo)抗體處與之特異性結(jié)合,再繼續(xù)流動到第一條紅線檢測線處。此處包被有抗體,與金標(biāo)結(jié)合物結(jié)合的HCG就會被此處抗體特異性地捕獲結(jié)合形成抗體-抗原-抗體這樣的夾心產(chǎn)物并停留在此處。當(dāng)足夠量的結(jié)合物在此處聚集后,肉眼能夠觀測得到一條鮮紅的條帶,結(jié)果就為陽性。

膠體金的應(yīng)用
膠體金技術(shù)既可用于抗原抗體檢測,也可用于體內(nèi)生物活性物質(zhì)、激素、半抗原等小分子物質(zhì)的檢測。可廣泛應(yīng)用于動物疫病快速診斷和獸藥殘留快速檢測等領(lǐng)域。
1、在畜禽病毒診斷中可檢測豬瘟病毒抗體、豬藍(lán)耳病抗體,此外還能檢測犬瘟熱、狂犬病、乙型肝炎等多種疫病。
2、在寄生蟲病診斷中可檢測吸血蟲病抗體、弓形蟲抗體等疾病抗體。
3、在獸藥殘留中可檢測氯霉素、鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、鏈霉素、四環(huán)素等藥物。
4、在食品安全中可檢測真菌毒素類,例如黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、T-2毒素等。
5、在毒品中可檢測嗎啡、冰毒、K粉等。
膠體金試驗流程
1、標(biāo)記
·用0.2M 碳酸鉀調(diào)節(jié)膠體金溶液ph到待標(biāo)記蛋白等電點略偏堿位置
·加入一定量標(biāo)記蛋白混勻
·加入BSA或其他穩(wěn)定劑封閉膠體金剩余位點,同時給金標(biāo)提供一個穩(wěn)定的微環(huán)境
·純化,一般用離心法,是為了去除掉未標(biāo)記的蛋白以及置換保存液
·干燥,將復(fù)溶后的金標(biāo)蛋白干燥于固相載體上,一般是玻纖紙或聚酯膜
2、包被
將蛋白稀釋到一定濃度用點膜儀包被在NC膜上干燥固定
3、組裝測試
(資料來源:鐘鼎生物)