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天然蛋白純化
(Custom Natural Protein Isolation and Purification )
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技術(shù)待認(rèn)領(lǐng)

技術(shù)概述

一個(gè)典型的真核細(xì)胞可以包含數(shù)以千計(jì)的不同蛋白質(zhì),一些含量十分豐富,一些僅含有幾個(gè)拷貝。為了研究某一個(gè)蛋白質(zhì),必須首先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來(lái)。

蛋白純化要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異,利用各種蛋白間的相似性來(lái)除去非蛋白物質(zhì)的污染,而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來(lái)。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學(xué)活性都會(huì)有差異,利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來(lái)得到重組蛋白。

天然蛋白純化就是從天然樣品中提取較高純度天然蛋白的過程。天然樣品成分復(fù)雜,純化過程一般要經(jīng)過粗提、初步純化和精細(xì)純化等步驟。天然蛋白的純化手段包括抽提、沉淀、離心、層析等,高純度天然蛋白可以通過色譜法進(jìn)行分離制備。

蛋白純化主要方法:

(1)根據(jù)分子大小不同的分離方法:透析和超過濾(利用蛋白質(zhì)分子不能通過半透膜的性質(zhì));密度梯度離心(蛋白質(zhì)在介質(zhì)中離心時(shí)質(zhì)量和密度較大的顆粒沉降較快);凝膠過濾(一種柱層析);
(2)利用溶解度差別分離:等電點(diǎn)沉淀法(由于蛋白質(zhì)分子在等電點(diǎn)時(shí)凈電荷為零,減少了分子間靜電斥力,因而容易聚集沉淀,此時(shí)溶解度最?。?;鹽溶與鹽析(利用一定濃度鹽溶液增大或減小蛋白質(zhì)的溶解度);
(3)根據(jù)電荷不同的分離方法,主要包括電泳和離子交換層析分離;
(4)蛋白質(zhì)的選擇吸附分離(利用顆粒吸附力的強(qiáng)弱不同達(dá)到分離目的);
(5)根據(jù)配體特性的分離——親和層析(利用蛋白質(zhì)分子與另一種稱為配體的分子能夠特異而非共價(jià)地結(jié)合這一生物性質(zhì));
(6)低溫有機(jī)溶劑沉淀法:用與水可混溶的有機(jī)溶劑,甲醇,乙醇或丙酮,可使多數(shù)蛋白質(zhì)溶解度降低并析出,此法分辨力比鹽析高,但蛋白質(zhì)較易變性,應(yīng)在低溫下進(jìn)行。

(資料來(lái)源:百度百科)

技術(shù)詳情

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